為什么SPE操作中會(huì)出現(xiàn)流速很慢或流速不一致、回收率低、平行性差的情況呢？這些問題可能很多小伙伴都遇到過。是小柱選擇不合適，方法有問題嗎？還是填料粒徑分布不均一，裝填松緊程度不穩(wěn)定？其實(shí)SPE小柱每個(gè)批次的流速都有嚴(yán)格的質(zhì)控范圍，質(zhì)控范圍內(nèi)的小柱能夠保證流速的穩(wěn)定性，質(zhì)控范圍之外的小柱會(huì)被作為異常品處理。那是不是采用穩(wěn)定的方法，使用經(jīng)出廠流速檢測合格的小柱就能*避免這些問題呢？

       其實(shí)還有一個(gè)非常容易被大家忽略的細(xì)節(jié)也會(huì)導(dǎo)致流速過慢：SPE小柱在運(yùn)輸過程中篩板和填料可能會(huì)出現(xiàn)微小的松動(dòng)，導(dǎo)致空氣進(jìn)入填料（一般不容易被肉眼發(fā)現(xiàn)），含有空氣的填料在氣壓的作用下導(dǎo)致溶劑流下速度很慢。說到這里大家就能夠理解為什么同一批小柱會(huì)出現(xiàn)流速參差不齊的情況了。那我們在SPE實(shí)驗(yàn)操作中如何解決這個(gè)問題呢？

一  排氣泡

1.1 排氣泡的方法

√ 正壓排除氣泡

       樣品數(shù)量比較少，填料量比較少，人工施加正壓比較方便的情況下，可以使用注射器連接轉(zhuǎn)接頭的方式進(jìn)行正壓排除氣泡。

√ 負(fù)壓排除氣泡

       樣品數(shù)量比較大，填料量較多，人工施加正壓不方便的情況下，可以使用真空泵連接固相萃取裝置的方法，負(fù)壓排除氣泡。

1.2 何時(shí)排氣泡？

       SPE操作中，一般包含活化平衡、上樣、淋洗、洗脫四個(gè)步驟。是每一步都需要排氣泡嗎？當(dāng)然不是，一般在填料之間有空隙的情況下需要進(jìn)行排氣泡的操作，比如加入活化平衡溶液之后，就需要進(jìn)行排氣泡的操作，使得溶液能夠更好的與填料接觸。

       還有一個(gè)容易被忽視的環(huán)節(jié)也是需要排氣泡的，一般淋洗后需要進(jìn)行抽干操作，抽干后填料間也會(huì)有空氣進(jìn)入，加入洗脫液后，也是需要進(jìn)行排氣泡操作的，否則大量的氣泡也會(huì)嚴(yán)重影響洗脫液的流速以及洗脫效果。

1.3 排氣泡的注意事項(xiàng)

       排氣泡時(shí)，一般排除1/3柱管體積的溶劑即可排除填料中的氣泡，切記不可以將溶液排干。防止排干，手動(dòng)排氣泡的速度不易過快，但也不能過慢，過緩的速度可能會(huì)排不出較大的氣泡。

       如果活化平衡溶液一不小心排干了怎么辦？只要重新加入活化溶劑進(jìn)行排氣泡就可以了。

       正確的排除氣泡就可以在一定程度上避免流速過慢或流速不一致的情況了。那我們的回收率、平行性就能得到保證嗎？還有一個(gè)神奇的小操作——抽干，同時(shí)做好這兩步，才能讓我們得到一個(gè)更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

二  抽干

 何時(shí)抽干？

× 活化平衡溶液、上樣液不需要抽干

       活化平衡過程的主要目的有兩個(gè)，一是清洗填料，洗去填料中本底，二是便于鍵合相分子的展開。主要是一些長鏈的官能團(tuán)，例如C18在填料是干的情況下不是*展開的狀態(tài)，活化可以使填料官能團(tuán)濕潤和舒展，使之保持對(duì)目標(biāo)化合物的大吸附活性。

       所以活化平衡過程是不需要進(jìn)行抽干的。

       有小伙伴曾經(jīng)問到上樣液是否需要抽干操作？上樣液與淋洗液的極性一般是比較相似的，所以上樣液也是不需要進(jìn)行抽干的。

√ 淋洗液、洗脫液需要抽干

       淋洗液需要抽干的原因主要有兩個(gè)：

       ①一般淋洗液與洗脫液的極性相差會(huì)較大（如淋洗液是水，洗脫溶劑為正己烷或二氯甲烷），兩種溶劑不互溶或溶解性較差，這會(huì)導(dǎo)致洗脫液流不下來或流速較慢，阻礙洗脫溶劑與目標(biāo)物的接觸，洗脫效果差，回收率低。

       ②淋洗液如果是水的話，不進(jìn)行抽干，會(huì)有部分被收集到洗脫液中，洗脫液如果進(jìn)行氮吹的話，含水的洗脫液也是很難進(jìn)行吹干的，如果進(jìn)行長時(shí)間的氮吹將少量的水溶液吹干的話會(huì)導(dǎo)致回收率偏低的情況出現(xiàn)，所以淋洗之后是需要進(jìn)行抽干操作的。

       洗脫之后會(huì)有部分洗脫溶劑殘留在填料上，填料量較多的時(shí)候，甚至?xí)埩?~2mL的洗脫液，無法*回收洗脫液，導(dǎo)致回收率低，平行性差。為了保證洗脫溶劑與目標(biāo)物*被回收也是需要進(jìn)行抽干的。

總結(jié)

√ 活化平衡、洗脫前進(jìn)行排氣泡。

√ 淋洗、洗脫后進(jìn)行抽干。